结论前置：工资单上有加班工资且已签字，一般情况下不能直接否定加班工资的主张，但能否最终获得支持需视具体情况而定。以下从不同角度进行分析：
一、签字行为的法律性质
签字行为在法律上通常被视为对文件内容的认可和确认。然而，在劳动争议中，签字并不总是意味着对所有内容的无条件接受。特别是当涉及到劳动者权益，如加班工资时，法律对劳动者的保护更为严格。因此，即使工资单上有加班工资且已签字，如果劳动者有证据证明实际加班情况与工资单记录不符，或者加班工资的计算方式不符合法律规定，仍然可以主张加班工资。
二、加班工资的举证责任
在劳动争议中，关于加班工资的举证责任通常遵循“谁主张，谁举证”的原则。但考虑到劳动者在劳动关系中的弱势地位，法律也规定了一些特殊情况下的举证责任倒置。不过，就一般情况而言，劳动者需要提供证据证明其实际加班的时间、加班工资的计算方式以及用人单位未足额支付加班工资的事实。这些证据可以包括考勤记录、加班通知、工作记录、同事证言等。
三、工资单签字后的法律后果
如果工资单记录准确无误：即工资单上记录的加班工资与劳动者实际加班情况相符，且计算方式符合法律规定，那么劳动者在签字后通常不能再主张额外的加班工资。因为此时签字行为已经构成了对工资单内容的认可。
如果工资单记录存在错误或遗漏：即工资单上记录的加班工资与劳动者实际加班情况不符，或者加班工资的计算方式不符合法律规定，那么劳动者在签字后仍然可以主张加班工资。但此时，劳动者需要承担举证责任，证明实际加班情况和加班工资的计算方式。
四、实际操作建议
保留证据：劳动者应妥善保留与加班相关的所有证据，包括但不限于考勤记录、加班通知、工作记录等。这些证据将在主张加班工资时发挥关键作用。
及时沟通：如果劳动者发现工资单上的加班工资记录有误或遗漏，应及时与用人单位沟通并要求更正。如果沟通无果，可以考虑通过法律途径解决争议。
咨询专业律师：在处理劳动争议时，咨询专业律师是非常重要的。律师可以根据劳动者的具体情况提供针对性的法律建议和帮助，提高劳动者主张加班工资的成功率。
最后，工资单上有加班工资且已签字并不意味着劳动者就不能再主张加班工资。关键在于劳动者能否提供证据证明实际加班情况与工资单记录不符或加班工资的计算方式不符合法律规定。如果你有具体的法律问题或需要进一步的帮助，请直接向我咨询。