虚拟打卡一次是否会被公司开除，并不能一概而论，而需根据具体情况及公司的规章制度、法律法规等综合判断。

1. 规章制度的合法性与公示：

   • 公司需有合法制定且向员工有效公示的规章制度，明确规定禁止使用虚拟定位软件打卡及相应后果。若公司未制定相关制度或未有效公示，则不能以此为由解除劳动合同。

2. 证据的充分性与合法性：

   • 公司需有充分且合法的证据证明员工使用了虚拟定位软件打卡。例如，明确的软件使用记录、后台数据等。若证据不足或证据取得方式不合法，则不能作为解除劳动合同的依据。

3. 解除程序的合规性：

   • 公司解除劳动合同需遵循法定程序，如事先通知工会、提前通知员工等。若未履行相关程序，即使员工有虚拟打卡行为，公司也可能面临违法解除的风险。

4. 综合判断：

   • 在考虑是否开除员工时，公司还需综合考量员工的虚拟打卡行为是否构成“严重违反”规章制度、是否对公司造成实际损失等因素。若员工仅虚拟打卡一次，且未对公司造成严重影响，公司可能更倾向于给予警告或其他轻微处罚，而非直接开除。

因此，虚拟打卡一次是否会被公司开除，需根据公司的规章制度、法律法规以及具体情况进行综合判断。若你对此类问题有疑问或面临相关纠纷，可直接向我咨询，我将为你提供专业的法律建议和支持。