一审未申请笔迹鉴定，二审时是否可以申请，需根据具体情况来判断。以下是从不同角度进行的详细分析：
可以申请的情况
存在新证据或正当理由：
- 如果一审结束后，当事人发现了新的证据，这些证据与笔迹的真实性直接相关，且可能对一审判决产生实质性影响，二审法院在审查后可能会允许进行笔迹鉴定。例如，新发现的原始文件、与笔迹形成时间或条件相关的证据等。
- 若当事人在一审时因客观原因（如重大疾病、不可抗力等）无法及时申请笔迹鉴定，或由于对法律程序的不了解而未能意识到鉴定的重要性，且在二审时能够提供合理证据证明这些情况，二审法院可能会酌情考虑允许进行笔迹鉴定。
一审法院未予批准：
- 如果一审期间当事人已经申请了笔迹鉴定，但由于一审法院没有法律依据或其他合理原因未予批准，导致鉴定未能进行，那么二审时当事人可以再次提出申请，二审法院在审查后可能会允许。
不可以申请的情况
一审未申请且无合理解释：
- 如果一审期间当事人没有在举证日期内申请笔迹鉴定，且没有合理解释为何未申请，那么在二审审理时，法院通常会认为这是当事人对自身诉讼权利的懈怠行使，因此可能不会允许再申请鉴定。
一审撤销申请且无充足理由：
- 如果一审期间当事人申请了笔迹鉴定后又撤销申请，且没有充足理由，二审法院同样可能不会允许再申请鉴定。
故意拖延诉讼或影响诉讼效率：
- 若二审时提出笔迹鉴定申请是出于故意拖延诉讼进程的目的，且当事人无法提供合理的解释为何在一审时不申请，或者如果允许申请鉴定会导致诉讼过程过度拖延，影响司法效率，法院通常会驳回该申请。
法律程序与注意事项
- 申请程序：当事人在二审中申请笔迹鉴定时，应向法院提交书面鉴定申请，明确鉴定事项、理由以及所依据的证据材料等。
- 法院审查：二审法院会对当事人的鉴定申请进行审查，判断是否符合法律规定且有必要进行鉴定。如果法院认为鉴定申请有必要，将会指定鉴定机构进行鉴定。
- 举证责任：当事人在民事诉讼中申请鉴定，应当在举证期限内提出。如果负有举证责任的当事人在人民法院指定的期限内无正当理由不提出鉴定申请、不预交鉴定费用或不提供相关材料，导致案件争议的事实无法通过鉴定结论认定，该当事人应当承担举证不能的法律后果。
建议
当事人在决定是否申请笔迹鉴定时，应充分考虑一审的具体情况、二审时的新证据或理由，以及法院对案件审理的必要性评估。如果认为有必要申请笔迹鉴定，应尽早准备相关证据和材料，并在二审时及时向法院提出申请。同时，也可以直接向我咨询，以获取更具体的法律建议和帮助。