结论：工程结算单已盖章签字且付款手续已办但未付款的情况下，诉讼中是否需要重新审计，需根据具体情况判断，一般不需要重新审计，但在特定情形下可能需要。以下从不同角度进行分析：
一、一般不需要重新审计的情形
结算单的法律效力：
- 工程结算单是双方对工程价款进行结算的书面文件，一旦双方签字盖章，即具有法律效力，对双方均具有约束力。
- 如果结算单内容明确、具体，且双方对结算金额无异议，那么在诉讼中，该结算单通常可以作为认定工程价款的直接证据，无需重新审计。
付款手续的办理：
- 付款手续的办理表明双方对付款事项已经达成一致，且发包方（或付款方）已经按照约定或法律规定完成了付款前的准备工作。
- 如果付款手续齐全，但发包方（或付款方）未实际付款，这通常构成违约行为，承包方（或收款方）有权依据结算单和付款手续要求发包方（或付款方）支付工程款，而无需重新审计。
二、可能需要重新审计的情形
结算单存在争议：
- 如果双方对结算单的内容存在争议，例如对工程量、单价、计算方式等有异议，那么在诉讼中，法院可能会根据当事人的申请或依职权委托审计机构对工程价款进行重新审计。
- 这种情况下，重新审计的目的是为了确定双方争议的工程价款金额，以便法院作出公正的判决。
结算单存在瑕疵：
- 如果结算单存在瑕疵，例如签字盖章不真实、内容不明确、存在涂改等，那么该结算单的法律效力可能会受到质疑。
- 在这种情况下，如果双方无法就工程价款达成一致，法院也可能会根据当事人的申请或依职权委托审计机构对工程价款进行重新审计，以确定真实的工程价款金额。
合同有特别约定：
- 如果双方在合同中明确约定了工程价款的结算方式、审计程序等，且该约定不违反法律、行政法规的强制性规定，那么双方应当按照合同约定履行。
- 如果合同约定了工程价款需要经过特定机构审计后才能确定，或者约定了审计作为付款的前提条件等，那么在诉讼中，法院可能会根据合同约定委托审计机构进行重新审计。
三、法律建议
收集证据：
- 在诉讼前，承包方（或收款方）应当收集好工程结算单、付款手续、合同等相关证据材料，以便在诉讼中证明自己的主张。
咨询专业律师：
- 如果对结算单的法律效力、是否需要重新审计等问题存在疑问，建议及时咨询专业律师，以便获得更具体的法律建议和指导。
积极应对诉讼：
- 如果发包方（或付款方）未按照结算单和付款手续支付工程款，承包方（或收款方）应当积极应对诉讼，按照法院的要求提供证据材料，参与庭审活动，以维护自己的合法权益。
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