结论前置：在妻子起诉离婚的情况下，丈夫确实可以要求分居期间的抚养费，这一要求具有明确的法律依据和司法实践支持。

法律依据与解析

1. 抚养义务的持续性：

   • 根据《中华人民共和国民法典》第一千零五十八条，夫妻双方平等享有对未成年子女抚养、教育和保护的权利，并共同承担相应的义务。这一条款强调了父母对子女抚养义务的平等性和共同性，即便在夫妻分居期间，该义务也不因此而改变。因此，丈夫作为父母一方，在分居期间仍负有抚养子女的义务，若未履行，则另一方（妻子或子女本人）有权要求其支付抚养费。

2. 具体请求权依据：

   • 《中华人民共和国民法典》第一千零六十七条进一步规定，若父母不履行抚养义务，未成年子女或不能独立生活的成年子女有要求父母给付抚养费的权利。这意味着，在分居期间，如果丈夫未履行抚养义务，妻子可以代表子女要求丈夫支付抚养费。

3. 司法实践参考：

   • 最高人民法院关于适用《中华人民共和国民法典》婚姻家庭编的解释（一）第四十三条为司法实践提供了明确指引。该条规定指出，在婚姻关系存续期间，包括分居阶段，若父母一方或双方拒不履行抚养子女义务，子女请求支付抚养费的，人民法院应予支持。这为在离婚诉讼中主张分居期间抚养费提供了有力的法律支撑。

实际操作建议

• 保留证据：在实际操作中，妻子（或抚养子女的一方）应保留好分居期间的费用支出记录，如子女的日常生活费用、教育费用、医疗费用等，以及能够证明子女生活和教育需求的证据，如学校证明、医疗记录等。这些证据将有助于在离婚诉讼中有力地主张自己的权益。

• 提出主张：在离婚诉讼中，妻子可以明确提出要求丈夫支付分居期间的抚养费，并提交相关证据支持自己的主张。法院将根据双方的经济状况、子女的实际需求以及当地的生活水平等因素，综合判断并确定抚养费的数额和支付方式。

可能的法律后果

• 若丈夫被判支付抚养费：如果法院认定丈夫在分居期间未履行抚养义务，且妻子（或子女）的主张合理合法，那么丈夫将被判支付相应的抚养费。这将对丈夫的经济状况产生一定影响，但同时也是其作为父母应尽的法律义务。

• 若丈夫拒绝支付：如果丈夫在法院判决后仍拒绝支付抚养费，妻子可以向法院申请强制执行，通过法律手段迫使丈夫履行支付义务。这将对丈夫的信用记录和个人声誉产生负面影响。

总结与建议：在妻子起诉离婚的情况下，丈夫可以要求分居期间的抚养费，但这一要求需要基于明确的法律依据和充分的证据支持。作为抚养子女的一方，妻子应保留好相关证据，并在离婚诉讼中明确提出自己的主张。如果遇到任何法律问题或需要进一步的法律帮助，可以直接向我咨询。