休假期间一把手更换，一般不需要重新请假，但具体情况需结合单位规章制度及请假流程来判断，以下是详细分析：

1. 从法律层面看：员工休假权受法律保护，如《职工带薪年休假条例》等规定了员工享有带薪年休假等权利。员工已按单位规定流程提交请假申请并获批准，休假期间领导更换，并不影响已获批的请假效力。因为请假审批是基于单位规章制度和员工实际情况作出的，与具体审批领导个人无关。
2. 从单位规章制度层面看：若单位规章制度明确规定，请假需经特定领导审批，且该领导在员工休假期间更换，新领导对原审批有异议或要求重新审批，此时员工可能需按新领导要求重新履行请假手续。但这种情况较为少见，且单位规章制度不得违反法律法规强制性规定。
3. 从实际操作层面看：为避免不必要的麻烦，员工在休假期间得知一把手更换后，可主动与新领导或单位人力资源部门沟通，说明休假情况，确认是否需要补充相关手续或材料。这样既能体现对工作的负责态度，也能确保休假顺利进行。