上级单位不能以工作为由直接要求下级单位五一不休息加班。下面我将从几个方面详细解释这一结论：

1. 法律法规依据：

   • 根据《中华人民共和国劳动法》的相关规定，劳动者享有休息和休假的权利。五一假期是国家规定的法定节假日，劳动者有权在此期间休息。
   • 任何单位或个人都不得违反法律规定，剥夺劳动者的休息权利。

2. 加班的合法性：

   • 加班需要劳动者同意，并且应按照法律规定支付加班费或安排调休。
   • 上级单位不能单方面强制要求下级单位或劳动者在法定节假日加班，除非有特殊情况（如紧急任务、突发事件等），并且需要依法进行协商和补偿。

3. 单位间的层级关系：

   • 上级单位与下级单位之间虽然存在层级关系，但这种关系并不意味着上级单位可以随意要求下级单位违反法律法规。
   • 下级单位有权根据自身情况和法律规定，合理安排工作时间和休息时间。

4. 劳动者的权益保护：

   • 劳动者有权拒绝非法的加班要求，并可以向劳动监察部门投诉或寻求法律援助。
   • 如果上级单位强制要求下级单位或劳动者在五一假期加班，且未依法进行协商和补偿，那么这种行为将构成对劳动者权益的侵犯。

综上所述，上级单位不能以工作为由直接要求下级单位五一不休息加班。如果遇到类似情况，劳动者或下级单位可以依法维护自己的权益。如果你在这方面有任何疑问或需要进一步的法律咨询，请直接向我提问。