在民事诉讼中，一审未申请笔迹鉴定，二审时是可以申请的，但需满足一定条件并遵循法定程序。以下是对此问题的详细分析：
一、法律依据与原则
法律规定：
- 根据《最高人民法院关于民事诉讼证据的若干规定》第四十条，当事人申请重新鉴定，存在鉴定人不具备相应资格、鉴定程序严重违法、鉴定意见明显依据不足等情形的，人民法院应当准许。这为二审中申请重新鉴定提供了法律依据。
- 同时，该规定第四十一条也指出，对于一方当事人就专门性问题自行委托有关机构或者人员出具的意见，另一方当事人有证据或者理由足以反驳并申请鉴定的，人民法院应予准许。这同样适用于二审阶段。
基本原则：
- 二审中的鉴定申请应遵循“必要性”、“合理性”和“合法性”原则。即鉴定必须对案件有实质性影响，申请理由必须充分且合理，且必须符合法律规定的条件和程序。
二、可以申请鉴定的情形
一审未申请且有正当理由：
- 如果当事人在一审中因正当理由（如当时不知道存在相关鉴定需求、无法取得鉴定所需材料等）未申请鉴定，而在二审中发现该鉴定对案件结果有重大影响，可以向法院提出申请。例如，当事人在一审结束后才发现关键文件上的笔迹可能存在伪造情况，且该文件对案件结果至关重要，此时可以在二审中申请笔迹鉴定。
对一审鉴定结果有合理质疑：
- 若一审已经进行了鉴定，但存在鉴定人不具备相应资格、鉴定程序严重违法、鉴定意见明显依据不足等情形，当事人在二审中有权申请重新鉴定。例如，如果鉴定机构没有相应的鉴定资质，或者在鉴定过程中未按照规定的程序进行样本提取和比对，当事人就有权在二审中申请重新鉴定。
新的证据或对已有证据存在异议：
- 在二审期间，如果当事人有新的证据或对已有的证据存在异议，并认为需要通过司法鉴定来明确相关事实，可以向二审法院提出申请。但需注意的是，二审法院会对鉴定申请进行限制性把握，只有当法院认为鉴定申请理由成立，确实需要进行鉴定时，才会同意进行鉴定。
三、不可以申请鉴定的情形
无正当理由一审未申请：
- 如果当事人在一审中无正当理由未申请鉴定，而在二审才提出，一般情况下法院可能不予准许。这遵循了“谁主张，谁举证”的原则，要求当事人在合理的诉讼阶段及时提供证据。
不影响案件基本事实认定：
- 即使二审提出鉴定申请，但如果该鉴定结果对案件的基本事实认定没有实质性影响，法院通常也不会准许。例如，如果案件的核心争议焦点在于合同的履行情况，而鉴定结果与这一核心争议并无直接关联，法院可能会驳回鉴定申请。
原审鉴定无问题：
- 如果原审（包括一审、二审）诉讼过程中已经对笔迹或其他事项进行了鉴定，且没有证据证明原审的鉴定存在程序问题或实体错误，再审中通常不能再进行鉴定。除非当事人能提出新的证据证明原审的鉴定存在严重问题，否则法院不会准许重新鉴定。
四、申请流程与注意事项
申请期限：
- 当事人申请鉴定应当在人民法院指定的期限内提出，并预交鉴定费用。逾期不提出申请或者不预交鉴定费用的，视为放弃申请。
审查程序：
- 二审法院会对当事人的鉴定申请进行审查，主要考察鉴定事项与案件事实的关联性、鉴定材料的真实性和完整性以及鉴定申请的合法性和必要性。
鉴定结果：
- 如果法院准许进行鉴定，当事人应当配合鉴定机构的工作，并提供必要的协助。鉴定结果出来后，当事人可以对鉴定结果进行质证和辩论。
总结来说，二审程序中当事人可以申请笔迹鉴定和其他司法鉴定，但必须遵守法定程序，并在法院指定的期限内提出。同时，申请鉴定的理由必须充分且合理，以确保鉴定的有效性和公正性。如果您在二审中遇到笔迹鉴定相关问题，可以直接向我咨询，我会根据您的具体情况提供详细的法律建议。