结论前置：手机不上交本身一般不能直接作为开除员工的合法理由，但需结合具体情况判断。以下是详细分析：
从规章制度角度分析
- 如果公司有明确且合法的规章制度规定员工在工作期间必须上交手机（例如涉及商业秘密保护、安全生产等特殊岗位），且该规章制度已经过民主程序制定（如职工代表大会讨论通过）、向员工公示或告知，员工违反此规定，公司可以依据规章制度给予相应的纪律处分。不过，开除（解除劳动合同）通常属于最严厉的处分，一般要求员工存在严重违反规章制度的行为。仅仅一次手机不上交，可能难以直接认定为严重违反规章制度，除非规章制度中明确将此类行为列为严重违纪情形且员工知晓。
- 若公司没有相关规章制度，或者规章制度制定程序不合法、未向员工公示告知，那么以手机不上交为由开除员工就缺乏合法依据，属于违法解除劳动合同。员工可以要求公司继续履行劳动合同或者支付赔偿金（赔偿金标准为经济补偿标准的二倍，经济补偿按劳动者在本单位工作的年限，每满一年支付一个月工资的标准向劳动者支付。六个月以上不满一年的，按一年计算；不满六个月的，向劳动者支付半个月工资的经济补偿）。
从工作性质和实际影响角度分析
- 对于一些特殊岗位，如涉及国家机密、商业秘密、安全生产等，员工在工作期间使用手机可能会造成严重后果。例如，在涉及国家机密的科研岗位，员工使用手机可能会泄露机密信息；在化工生产岗位，员工使用手机可能会分散注意力导致安全事故。如果员工拒绝上交手机，且这种行为确实对工作造成了严重危害或者有造成严重危害的潜在风险，公司可能可以依据《劳动合同法》中“劳动者严重失职，营私舞弊，给用人单位造成重大损害的”或者“劳动者以欺诈、胁迫的手段或者乘人之危，使用人单位在违背真实意思的情况下订立或者变更劳动合同，致使劳动合同无效”等条款解除劳动合同。但公司需要承担举证责任，证明员工的行为达到了上述严重程度。
- 对于一般性岗位，员工工作期间使用手机可能只是影响工作效率等较小方面的问题，通常难以构成公司开除员工的合法理由。
从协商和沟通角度分析
- 在实际操作中，公司发现员工拒绝上交手机时，最好先与员工进行沟通和协商，了解员工拒绝上交的原因。如果是员工对公司的规定不理解或者存在误解，公司可以进行解释和说明；如果是员工有特殊情况（如家人突发疾病需要随时联系等），公司可以考虑给予一定的合理便利。通过沟通和协商解决问题，既可以避免矛盾激化，也有利于维护良好的劳动关系。
如果公司以手机不上交为由开除员工，员工认为公司的行为违法，可以通过与公司协商、向劳动监察部门投诉或者申请劳动仲裁等方式维护自己的合法权益。如果你有进一步的疑问或需要更具体的法律建议，可以直接向我咨询。