劳动者在认定劳动关系二审败诉后，一般不可以直接重新起诉用工主体责任，但可根据具体情况选择其他法律途径。以下是对此问题的详细分析：
一、二审败诉后的法律程序限制
在劳动争议案件中，如果劳动者在二审中败诉，意味着法院已经对劳动关系的认定作出了终审判决。根据民事诉讼法的相关规定，终审判决具有法律效力，当事人应当履行。因此，在一般情况下，劳动者不能就同一事实和理由再次向法院提起诉讼，要求重新认定劳动关系或起诉用工主体责任。
二、可能的法律途径
尽管二审败诉后不能直接重新起诉，但劳动者仍可根据具体情况选择其他法律途径来维护自己的权益：
申请再审：
- 如果劳动者认为二审判决存在错误，如事实认定不清、法律适用错误等，可以在法定期限内向上一级法院申请再审。
- 再审程序是对已经发生法律效力的判决、裁定进行审查的一种程序，如果再审法院认为原判决确有错误，可以裁定撤销原判决，发回重审或直接改判。
寻求其他法律救济：
- 如果劳动者与用工单位之间存在其他法律关系，如劳务关系、承揽关系等，并且因这些关系产生了纠纷，劳动者可以就这些纠纷向法院提起诉讼。
- 例如，如果劳动者能够证明与用工单位之间存在劳务关系，并且因劳务活动受到损害，可以依据《民法典》等相关法律规定，要求用工单位承担赔偿责任。
通过行政途径解决：
- 如果劳动者认为用工单位存在违法行为，如未签订劳动合同、未缴纳社会保险等，可以向劳动行政部门投诉。
- 劳动行政部门有权对用工单位的违法行为进行查处，并要求用工单位承担相应的法律责任。
三、注意事项
- 证据收集：无论选择哪种法律途径，劳动者都需要充分收集证据来支持自己的主张。证据是认定事实和适用法律的基础，没有充分的证据，劳动者的主张很难得到法院的支持。
- 法律咨询：由于劳动争议案件涉及的法律问题较为复杂，劳动者在处理此类案件时，建议咨询专业律师的意见。律师可以根据劳动者的具体情况，提供针对性的法律建议和帮助。
- 时效性：劳动者在处理劳动争议案件时，还需要注意时效性问题。例如，申请再审的期限、提起诉讼的期限等都有明确的法律规定，劳动者应当在法定期限内行使自己的权利。
如有任何法律疑问或需要进一步的法律帮助，请直接向我咨询。我将根据你的具体情况，提供针对性的法律建议和帮助。