可以起诉，但具体能否达到你的目的，需视起诉的具体诉求和事实情况而定。以下从不同角度为你详细分析：
一、关于分居期间起诉的合法性
在婚姻关系存续期间，即使双方已经分居，任何一方仍然享有法律上的诉讼权利。这意味着，如果你对分居期间的生活费、财产分割、子女抚养等问题有异议，都可以通过法律途径来维护自己的权益。因此，分居期间起诉是合法的，法院会受理你的起诉。
二、起诉的具体诉求与事实情况
生活费问题：
- 如果法院之前已经判决了生活费，但对方未按照判决履行，你可以就生活费问题再次起诉，要求对方履行判决或申请强制执行。
- 如果生活费的标准或支付方式需要调整，你也可以起诉要求变更原判决。
其他婚姻相关问题：
- 除了生活费，你还可以就分居期间的财产分割、子女抚养权、探视权等问题提起诉讼。
- 例如，如果你认为对方在分居期间隐藏、转移了共同财产，你可以起诉要求重新分割财产。
起诉的事实依据：
- 起诉时，你需要提供充分的事实依据来支持你的诉求。这包括但不限于分居协议、生活费支付记录、财产转移证据等。
- 法院会根据你提供的事实依据和法律规定来作出判决。
三、起诉的法律后果与建议
法律后果：
- 如果你的起诉得到法院的支持，对方可能需要履行判决义务，如支付生活费、分割财产等。
- 如果对方不履行判决，你可以申请强制执行，法院会采取相应措施来强制对方履行。
建议：
- 在起诉前，建议你先与对方进行协商，看是否能通过协商解决问题。协商不成时，再考虑起诉。
- 起诉时，你需要准备充分的证据来支持你的诉求。如果证据不足，可能会影响你的诉讼结果。
- 如果你对法律程序不熟悉，可以寻求专业律师的帮助。律师可以为你提供法律咨询、代理诉讼等服务。
案例说明：假设你和配偶已经分居，并且法院之前判决了配偶每月支付你一定金额的生活费。但配偶一直未履行判决，你可以就生活费问题再次起诉，要求配偶履行判决或申请强制执行。在起诉时，你需要提供分居协议、生活费支付记录等证据来支持你的诉求。