分居期间是可以起诉要求支付抚养费的。以下从法律背景、具体操作及法律后果几个方面为您详细分析：
一、法律背景
根据《中华人民共和国民法典》及相关司法解释，父母对未成年子女负有抚养、教育和保护的义务，这是法定的，不因夫妻分居而消失。在分居期间，即使父母双方未离婚，一方抚养子女面临生活、教育等费用支出时，另一方也应承担相应责任。若一方拒不履行抚养义务，未成年子女或者不能独立生活的成年子女有权请求支付抚养费，人民法院应予支持。
二、具体操作
收集证据：
- 子女生活费用支出凭证，如日常开销票据、学费明细等。
- 对方收入情况证明，如工资单、银行流水等。
- 其他能证明子女实际需求和父母经济状况的证据。
撰写起诉状：
- 详细说明一方未支付抚养费的情况。
- 提出诉讼请求，即要求对方支付拖欠的抚养费及可能的利息或违约金。
向法院提起诉讼：
- 将起诉状提交给当地人民法院，并按照法院的要求缴纳诉讼费用。
- 法院在受理案件后，会向被告发出传票，通知其出庭应诉。
出庭应诉：
- 在庭审过程中，向法院提供充分的证据证明对方未支付抚养费的事实。
- 阐述自己的诉讼请求和理由，对方也可以提出抗辩并提供证据。
- 法院将根据双方提供的证据和陈述进行审理，并作出判决。
三、法律后果
法院判决：
- 法院会根据子女的实际需要、父母双方的负担能力和当地的实际生活水平等因素，确定抚养费的数额和支付方式。
- 如果判决对方需要支付抚养费，但其仍拒绝支付，可以向法院申请强制执行。
强制执行：
- 法院会采取措施强制对方履行支付抚养费的义务，如冻结银行账户、查封财产等。
- 对方可能会面临限制高消费、列入失信被执行人名单等执行措施。
四、特别提示
- 抚养费数额的调整：随着子女成长，生活和教育成本可能发生变化，抚养费数额并非一成不变。如果一方认为抚养费数额需要调整，可以再次起诉要求变更。
- 协商解决：在起诉前，可以尝试与对方进行协商，寻求达成和解或调解协议。通过协商，可以就抚养费的支付方式、支付金额等达成一致意见，以避免进一步的法律纠纷。
分居期间，若一方未支付抚养费，另一方完全有权以子女的名义向法院提起诉讼，要求对方履行抚养义务。如果您在分居期间面临抚养费相关的问题，可以直接向我咨询，我会根据您的具体情况，为您提供专业的法律建议。