诉讼时效抗辩应当在一审期间，特别是法庭辩论终结前提出。这是基于法律程序效率和公平性的考虑，确保诉讼时效抗辩能够得到及时、有效的审查和处理。以下是对这一问题的详细分析：
一、一审期间提出诉讼时效抗辩
法律依据：
- 根据《最高人民法院关于审理民事案件适用诉讼时效制度若干问题的规定》第三条，当事人在一审期间应提出诉讼时效抗辩。这是法律明确规定的提出时机，旨在保障诉讼程序的顺利进行和当事人权益的及时保护。
实际操作：
- 在一审期间，当事人可以通过提交答辩状或口头方式提出诉讼时效抗辩。若选择口头方式，需在法庭指定期限内补交书面意见，以确保抗辩的准确性和完整性。
- 提出抗辩时，当事人应附上相关证据材料，如债权凭证、催款记录等，以证明诉讼时效已届满。
二、二审及再审期间提出诉讼时效抗辩的限制
二审期间：
- 原则上，二审期间提出的诉讼时效抗辩不予支持。但如有新的证据能证明对方请求权已过诉讼时效，法院将根据实际情况进行审查。这强调了新证据的重要性，以及二审作为补救措施的有限性。
再审期间：
- 再审期间通常不支持提出诉讼时效抗辩或以诉讼时效届满为由申请再审。这是为了确保诉讼程序的稳定性和终局性，避免当事人通过再审程序无限期地拖延诉讼。
三、特殊注意事项
放弃诉讼时效利益：
- 当事人通过约定放弃诉讼时效利益或在诉讼时效期间届满后自愿履行义务等行为，可能导致诉讼时效抗辩失效或被视为放弃。因此，在实际操作中应谨慎行事，避免不当行为导致抗辩失效。
新证据的重要性：
- 特别是在二审期间提出诉讼时效抗辩时，新证据的支持至关重要。当事人应积极搜集并提交能够证明对方请求权已过诉讼时效的新证据，以增加抗辩成功的可能性。
四、法律后果
- 若诉讼时效抗辩成立，法院将判决驳回原告诉讼请求（债权本身存在但丧失胜诉权），而非直接否定债权的合法性。这意味着，虽然原告的债权在法律上仍然存在，但由于超过了诉讼时效期间，原告将失去通过诉讼程序强制被告履行义务的权利。
五、建议与指导
- 及时提出抗辩：当事人应充分重视诉讼时效抗辩的提出时机，确保在一审期间，特别是法庭辩论终结前适时提出。避免因错过提出时机而导致抗辩失效。
- 准备充分证据：提出抗辩时，当事人应准备充分的证据材料以支持自己的主张。这有助于增加抗辩成功的可能性，并保护自己的合法权益。
- 咨询专业律师：在涉及诉讼时效抗辩的案件中，由于法律程序复杂且证据要求严格，建议当事人咨询专业律师以获取更具体的法律指导和帮助。
综上所述，诉讼时效抗辩的提出时间具有严格的规定和限制。当事人应充分了解并遵循相关法律法规和司法解释的规定，以确保自身权益得到有效保护。在实际操作中，应准确把握提出抗辩的时机，并准备好充分的证据以支持自己的主张。如有任何疑问或需要进一步的法律帮助，请直接向我咨询。