结论：在父母的房产已经通过分家协议给哥哥的情况下，父母一般不能再通过遗嘱将该房产给弟弟，但存在例外情况。以下从不同角度进行分析：
一、分家协议的法律效力
分家协议，若具备法律效力（即双方意思表示真实、不违反法律强制性规定、不违背公序良俗等），则对协议双方具有约束力。在此情况下，房产的所有权或使用权已经按照协议约定转移给了哥哥，父母不再拥有该房产的完整处分权。
二、遗嘱的设立与效力
遗嘱是遗嘱人生前在法律允许的范围内，按照法律规定的方式对其遗产或其他事务所作的个人处理，并于遗嘱人死亡时发生效力的法律行为。遗嘱的设立必须基于遗嘱人的真实意思表示，且遗嘱人必须对遗嘱所涉及的财产拥有处分权。
三、分家协议与遗嘱的冲突及解决
一般情况：
- 如果分家协议已经明确且合法地确定了房产的归属（即给哥哥），那么父母在之后设立的遗嘱中，若再试图将该房产给弟弟，则这部分遗嘱内容可能因违反之前的分家协议而无效。因为父母此时已经对该房产不拥有完整的处分权，无法再通过遗嘱进行处分。
例外情况：
- 分家协议存在瑕疵：如果分家协议存在无效或可撤销的情形（如因欺诈、胁迫、重大误解等导致），那么父母可能仍有权通过遗嘱处分该房产。但这种情况下，需要先通过法律程序确认分家协议的无效或撤销，然后再考虑遗嘱的效力。
- 房产部分归属或共有：如果分家协议仅涉及房产的部分权益（如使用权而非所有权），或者房产为父母与哥哥共有，那么父母可能仍有权通过遗嘱处分其拥有的部分权益。但这种情况下，遗嘱的效力也仅限于父母所拥有的部分。
- 后续取得财产：如果分家协议后，父母又通过某种方式（如购买、赠与等）取得了该房产的完整所有权或部分权益，那么他们当然有权通过遗嘱处分这部分新取得的财产。
四、法律建议
- 审查分家协议：首先，需要仔细审查分家协议的内容，确认其是否合法有效，以及是否明确确定了房产的归属。
- 咨询专业律师：如果分家协议存在争议或不明确之处，建议咨询专业律师，通过法律程序确认分家协议的效力或寻求解决方案。
- 考虑遗嘱的合法性：在设立遗嘱时，应确保遗嘱内容合法有效，且不违反之前的分家协议或其他法律义务。
总结：在父母的房产已经通过分家协议给哥哥的情况下，父母一般不能再通过遗嘱将该房产给弟弟。但具体还需根据分家协议的效力、房产的归属情况以及后续可能发生的法律事实进行综合判断。如果有任何疑问或需要进一步的法律帮助，请直接向我咨询。