第二次起诉离婚时，分居起止时间的计算需结合第一次起诉时的具体情况及分居状态的连续性综合判断，具体分两种情形：

1. 若第一次起诉时法院未认定分居事实，或分居状态在第一次诉讼后中断又重新开始
   此时分居时间应从第二次起诉时实际分居之日起算。例如：夫妻于2020年1月开始分居，2021年1月第一次起诉离婚，但法院未认定分居事实（如未提供充分证据），或2021年6月双方短暂共同生活后再次分居，则第二次起诉时（2022年1月）的分居时间应从2021年6月后重新分居之日起计算。
   法律依据：根据《民法典》第1079条，法院判决离婚的关键是“感情确已破裂”，而“因感情不和分居满二年”是法定情形之一。若分居状态不连续，需以最后一次分居时间为起点重新计算。

2. 若第一次起诉时法院已认定分居事实，且分居状态持续至第二次起诉时
   此时分居时间应从第一次起诉前实际分居之日起连续计算。例如：夫妻于2020年1月开始分居，2021年1月第一次起诉离婚时提交了租房合同、证人证言等证据证明分居事实，法院未判决离婚后双方仍持续分居，至2022年1月第二次起诉时，分居时间应从2020年1月起算，已满2年，符合法定离婚条件。
   关键点：需提供证据证明分居状态未中断（如持续缴纳房租的记录、社区证明、双方聊天记录等），否则可能被认定为分居时间重新起算。

实务建议：

• 保留分居期间的证据（如租房合同、水电费缴纳记录、分居协议、亲友证言等），证明分居的连续性；
  
• 若第一次起诉后分居状态发生变化（如短暂共同生活），需及时固定新分居时间的证据；
  
• 第二次起诉时，可在诉状中明确分居起止时间，并附证据清单，便于法院认定。
  

如有具体证据或时间线需要分析，可进一步向我说明，我会结合细节为您梳理法律风险。