二次起诉离婚时，同事的书面证明可以作为分居的证据使用，但其证明力需结合其他证据综合判断。以下从不同角度为你详细分析：

1. 证据类型与效力
   同事的书面证明属于“证人证言”，是法定证据形式之一。根据《民事诉讼法》第66条，证据需查证属实后才能作为认定事实的依据。同事作为第三方，若能客观陈述其观察到的分居事实（如你长期独自居住、未与配偶共同出入等），其证言具有一定证明力。但需注意：

   • 证人需出庭接受质询（除非符合《民事诉讼法》第76条的书面证言条件），否则可能被法院排除；
     
   • 同事与你的关系可能影响其证言可信度，需结合其他证据补强。

2. 分居事实的证明要求
   离婚诉讼中，分居需满足“因感情不和”且“连续满两年”的条件（民法典第1079条）。同事的证言需重点证明：

   • 分居的起始时间（需与其他证据如租房合同、水电费记录等印证）；
     
   • 分居期间未共同生活（如同事未见过配偶来访、你未提及共同生活等细节）。
     若证言仅笼统陈述“分居”，缺乏具体事实支撑，可能被法院认定为证明力不足。

3. 与其他证据的关联性
   为增强证明力，建议补充以下证据形成证据链：

   • 居住证明：如租房合同、物业缴费记录、居委会证明等；
     
   • 通信记录：与配偶的聊天记录、邮件等，证明双方无情感交流；
     
   • 第三方证据：如共同朋友、邻居的证言，或快递地址、外卖记录等显示单独居住的痕迹。
     同事证言与上述证据相互印证时，法院采信概率会显著提高。

4. 实务建议

   • 提前与同事沟通，确保其愿意出庭作证或提供书面证言，并明确陈述细节（如分居时间、观察到的具体行为）；
     
   • 避免让同事作虚假陈述，否则可能承担法律责任；
     
   • 若分居事实复杂，可委托律师调取更多证据（如监控记录、出行记录等），提高诉讼效率。

总结：同事的书面证明可用，但需结合其他证据形成完整证据链。若你正在准备二次起诉离婚，建议整理所有能证明分居的证据，并咨询专业律师制定诉讼策略，以最大限度维护自身权益。