结论：在已经分居且第一次起诉未判离的情况下，第二次起诉的最佳最快时间通常是在第一次判决生效后六个月，但具体还需考虑分居时间、感情破裂证据等因素。

详细分析：

1. 法律程序角度：

   • 根据《中华人民共和国民事诉讼法》的相关规定，判决不准离婚和调解和好的离婚案件，没有新情况、新理由，原告在六个月内又起诉的，法院不予受理。这意味着，在第一次判决生效后，你需要等待六个月才能再次提起离婚诉讼。这是法律程序上的基本要求，也是确保诉讼效率的重要规定。

2. 分居时间角度：

   • 虽然法律没有明确规定分居多久可以再次起诉离婚，但分居时间的长短可以作为判断夫妻感情是否破裂的重要依据。如果你们已经分居较长时间，且分居期间没有和好的迹象，那么这可以作为你第二次起诉离婚的有力证据。因此，在等待六个月的同时，你可以继续收集分居期间的证据，如租房合同、水电费账单、社区证明等，以证明你们确实处于分居状态。

3. 感情破裂证据角度：

   • 除了分居时间外，你还需要收集其他能够证明夫妻感情破裂的证据。这些证据可以包括但不限于：通信记录、聊天记录、证人证言、照片或视频等。这些证据将有助于你在第二次起诉时说服法院判决离婚。因此，在等待六个月的过程中，你可以积极收集这些证据，为第二次起诉做好充分准备。

4. 实际操作建议：

   • 在等待六个月期间，你可以与对方进行沟通，尝试通过协商或调解的方式解决离婚问题。如果协商或调解无果，你可以在六个月期满后立即向法院提起第二次离婚诉讼。
   • 在提起第二次诉讼时，你需要准备充分的证据来证明夫妻感情已经破裂且无和好可能。这些证据应该包括分居时间的证明、感情破裂的其他证据以及你的诉讼请求和理由等。

特殊情况说明：

• 如果在等待六个月期间出现了新情况或新理由，如对方有重婚、与他人同居、实施家庭暴力或虐待、遗弃家庭成员等行为，你可以不受六个月期限的限制，立即向法院提起第二次离婚诉讼。

总结与建议：

• 在已经分居且第一次起诉未判离的情况下，第二次起诉的最佳最快时间通常是在第一次判决生效后六个月。但具体还需考虑分居时间、感情破裂证据等因素。
• 我建议你在这段时间内积极收集证据，与对方进行沟通尝试协商或调解，并在六个月期满后立即向法院提起第二次离婚诉讼。如果你有任何疑问或需要进一步的法律帮助，请随时向我咨询。