核心结论：分居证明的提交时间没有严格限定，但建议在第二次起诉离婚前准备好，并在庭审时提交；若法院提前要求补充材料，则需按法院要求的时间提交。以下是详细说明：

1. 分居证明的提交时间原则
   在第一次起诉离婚未判离后，若双方持续分居满一年（根据《民法典》第1079条，此为法定离婚情形之一），第二次起诉时需提交分居证明。此时，分居证明的提交时间通常与第二次起诉的庭审时间相关：

   • 庭审时提交：分居证明是证明夫妻感情破裂的关键证据，建议在第二次起诉的庭审中直接提交，以便法院综合审查。
     
   • 法院要求补充时提交：若法院在立案阶段或审理过程中要求补充材料（如通过《举证通知书》明确期限），则需在法院指定的时间内提交，否则可能影响证据效力。

2. 分居证明的准备要点
   无论何时提交，分居证明需满足“真实性、合法性、关联性”要求，常见形式包括：

   • 居住证明：如租房合同、物业缴费记录、居委会证明等，证明双方分居且不在同一住所；
     
   • 沟通记录：如微信、短信、邮件中明确提及分居事实的对话；
     
   • 证人证言：如亲友、邻居的书面证言，证明双方分居状态；
     
   • 其他辅助证据：如分居期间的经济独立证明（如各自银行流水、独立缴纳水电费的记录等）。
     

3. 注意事项

   • 分居时间计算：分居需连续满一年，且中间无间断（如短暂同居可能中断分居时间）；
     
   • 证据链完整性：单一份证据可能不足以证明分居事实，需结合多份证据形成完整链条；
     
   • 法院审查重点：法院会重点审查分居原因（是否因感情不和）、分居期间是否履行夫妻义务（如经济支持、子女抚养等），需提前准备相关说明。
     

建议：若您已准备第二次起诉离婚，可先整理分居证明材料，并联系法院确认是否需要提前提交或补充其他材料。如有具体证据或案件细节需要分析，可直接向我咨询，我会结合您的实际情况提供进一步指导。