无牌的电动两轮、三轮上路违章酿成重大交通事故，是需要承担责任的。以下从几个关键角度为你详细分析：
一、法律责任基础
根据《中华人民共和国道路交通安全法》的相关规定，车辆上路必须符合法定条件，包括但不限于车辆必须经过公安机关交通管理部门登记，取得行驶证，并悬挂机动车号牌。对于电动两轮、三轮车，如果它们被认定为机动车（这通常取决于车辆的速度、重量等参数），那么它们就必须遵守机动车的管理规定。无牌上路，本身就是一种违法行为，一旦因此酿成交通事故，驾驶者将承担相应的法律责任。
二、事故责任划分
在交通事故中，责任的划分通常基于事故各方的过错程度。如果无牌的电动两轮、三轮车因违章行为（如闯红灯、逆行、超速等）导致事故发生，那么驾驶者很可能被认定为事故的主要或全部责任方。这种责任划分不仅考虑了违章行为本身，还考虑了违章行为对事故发生的直接作用。
三、责任承担方式
民事赔偿：如果事故造成他人人身伤害或财产损失，驾驶者需要承担民事赔偿责任。这包括赔偿医疗费、误工费、护理费、残疾赔偿金、死亡赔偿金以及财产损失等。赔偿的金额将根据事故的具体情况和受害者的损失程度来确定。
行政处罚：除了民事赔偿外，驾驶者还可能面临行政处罚。根据《中华人民共和国道路交通安全法》的规定，无牌上路、违章驾驶等行为将受到罚款、扣分、拘留等行政处罚。这些处罚的严厉程度将取决于违章行为的性质和后果。
刑事责任：在极端情况下，如果事故造成严重后果（如多人死亡或重伤），驾驶者还可能构成交通肇事罪，需要承担刑事责任。根据《中华人民共和国刑法》的相关规定，交通肇事罪将受到有期徒刑、拘役等刑罚的处罚。
四、特殊情况考虑
虽然无牌的电动两轮、三轮车在事故中通常需要承担责任，但也有一些特殊情况需要考虑。例如，如果事故是由其他车辆的违章行为引起的，而电动两轮、三轮车只是正常行驶，那么电动两轮、三轮车的驾驶者可能不需要承担主要责任。然而，在这种情况下，驾驶者仍然需要证明自己的无过错行为，这可能需要通过交通监控录像、证人证言等证据来支持。
总结与建议：
无牌的电动两轮、三轮上路违章酿成重大交通事故，驾驶者是需要承担责任的。这种责任可能包括民事赔偿、行政处罚甚至刑事责任。因此，我建议电动两轮、三轮车的驾驶者务必遵守交通法规，确保车辆合法上路，并谨慎驾驶以避免事故发生。如果已经发生了事故，请尽快咨询专业律师以了解自己的权利和义务，并积极配合相关部门的调查和处理工作。如果你有任何关于交通事故处理或债权债务方面的法律问题，都可以直接向我咨询。