项目负责人离职后，其此前签字的结算单仍然有效。具体分析如下：

一. 项目负责人签字行为的法律效力

1. 职权范围内签字的效力：根据《中华人民共和国民法典》第一百七十条，执行法人或者非法人组织工作任务的人员，就其职权范围内的事项，以法人或者非法人组织的名义实施的民事法律行为，对法人或者非法人组织发生效力。这意味着，只要项目负责人在其职权范围内签字，该行为就对法人或非法人组织具有法律效力。
2. 离职不影响已签字文件的效力：项目负责人离职后，其在职期间签字的结算单并不因其离职而自动失效。签字行为是在其职权范围内进行的，且代表了法人或非法人组织的意愿，因此离职后该签字仍然有效。

二. 特殊情况下的处理

1. 存在争议的情况：如果项目负责人离职后，对方以项目负责人已离职为由对签字效力提出异议，双方可以通过协商或法律途径解决争议。
2. 证明签字真实性的重要性：在争议解决过程中，证明签字行为是项目负责人在职期间且在其职权范围内进行的将至关重要。这可以通过提供项目负责人在职期间的授权文件、签字记录等证据来实现。

综上所述，项目负责人离职后，其此前签字的结算单仍然有效。这是基于其在职期间且在职权范围内进行的签字行为所具有的法律效力。当然，如果双方对签字效力存在争议，应通过协商或法律途径解决，并注重证明签字行为的真实性。如有进一步需要，您可以继续咨询我。