诉讼时效抗辩应当在一审期间，特别是法庭辩论终结前提出。这是基于法律规定和司法实践得出的明确结论，下面我将从不同角度为您详细分析：
一、法律规定的提出时机
一审期间：
- 根据《最高人民法院关于审理民事案件适用诉讼时效制度若干问题的规定》第三条，当事人在一审期间应提出诉讼时效抗辩。这是最直接且有效的时机，能够确保抗辩得到充分的审查和判断。
- 若在一审期间未提出，而在后续程序中提出，将面临严格的限制。
二审期间：
- 原则上，二审期间提出的诉讼时效抗辩不予支持。但如有新的证据能证明对方请求权已过诉讼时效，法院将根据实际情况进行审查。这强调了新证据的重要性，以及二审作为补救措施的有限性。
再审期间：
- 再审期间通常不支持提出诉讼时效抗辩或以诉讼时效届满为由申请再审，以确保诉讼程序的稳定性和终局性。
二、实际操作中的最佳时机
证据充分时立即提出：
- 当您确信债权已过诉讼时效，且无中止、中断情形（如债权人未主张权利、无不可抗力等），应在首次开庭辩论阶段尽早提出抗辩，避免后续程序中被认定为“怠于行使权利”。
存在争议时灵活处理：
- 若债权人可能提供时效中断证据（如催款记录、还款承诺），您可暂不提出抗辩，待对方举证后再针对性反驳。例如，债权人出示一份无签收的快递单作为催收证明，您可通过笔迹鉴定、通信记录核查等方式否定其效力。
配合其他抗辩策略：
- 您可以将诉讼时效抗辩与其他实体抗辩（如合同无效、已清偿）结合使用。例如，在主张合同因欺诈无效的同时，补充指出即使合同有效也因过时效而不受保护。
三、提出抗辩时的注意事项
严格遵循法定形式要求：
- 必须以书面形式或通过法庭陈述明确表达“诉讼时效抗辩”意图，仅笼统否认债务不构成有效抗辩。例如，答辩状中需写明：“因原告起诉已超过三年诉讼时效，请求法院驳回其诉讼请求。”
警惕主动履行导致抗辩权丧失：
- 诉讼时效期间届满后，若您自愿履行债务，不得再以时效为由反悔。例如，时效届满后您部分还款，后续不得以剩余债务超时效为由拒付。
特殊情形下抗辩权的限制：
- 涉及人身损害赔偿请求权等不适用诉讼时效的情形，不得提出抗辩。分期履行的债务，每期应单独计算时效，不可笼统抗辩全部债务超时效。
四、法律后果
- 若法院认定抗辩成立，将判决驳回原告诉讼请求；若抗辩不成立，则继续审理案件实体问题并作出相应判决。
- 若未在一审提出抗辩，而在二审或再审期间提出，除非基于新的证据且能证明对方请求权已过诉讼时效，否则人民法院一般不予支持。
总结与建议：诉讼时效抗辩的提出时间具有严格的规定和限制，您应充分了解并遵循相关法律法规，以确保自身权益得到有效保护。在实际操作中，应准确把握提出抗辩的时机，并准备好充分的证据以支持自己的主张。若您有任何疑问或需要进一步的法律帮助，请直接向我咨询。