被告在二审上诉开庭时，原则上不能提出诉讼时效抗辩，但存在例外情形。具体分析如下：
一、原则上不能提出诉讼时效抗辩
根据《最高人民法院关于审理民事案件适用诉讼时效制度若干问题的规定》第四条，当事人在一审期间未提出诉讼时效抗辩，在二审期间提出的，人民法院不予支持。这一规定实质上是对诉讼时效抗辩权行使阶段的限制，旨在保证私权争议获得公正裁判，维护司法程序的安定性、司法裁决的权威性以及社会秩序的稳定性。如果允许义务人在任何审理阶段均可行使诉讼时效抗辩权，将导致法院无法在一审审理阶段固定讼争焦点，无法有效发挥一审事实审的功能，使审级制度的功能性设计流于形式。
二、例外情形：基于新的证据能够证明对方当事人的请求权已过诉讼时效期间
尽管原则上二审期间不能提出诉讼时效抗辩，但存在例外情形。即当事人基于新的证据能够证明对方当事人的请求权已过诉讼时效期间的，人民法院可以支持其抗辩主张。这一例外情形体现了法律对事实真相的追求和对当事人合法权益的保护。
三、实际操作中的建议
及时行使抗辩权：被告应在一审期间及时提出诉讼时效抗辩，避免因错过行使时机而导致权利丧失。
准备充分证据：如果被告打算在二审期间提出诉讼时效抗辩（尽管原则上不予支持），必须准备充分的证据证明对方当事人的请求权已过诉讼时效期间。这些证据应当是新的、且在一审期间无法获得的。
遵循法庭程序：在二审开庭时，被告应严格遵循法庭程序，按照法庭的安排进行陈述、举证和质证等活动。如果打算提出抗辩申请，应在法庭辩论阶段明确提出，并说明理由和依据。
四、法律后果
如果被告在二审期间未经允许擅自提出诉讼时效抗辩，且无法提供新的证据证明对方当事人的请求权已过诉讼时效期间，人民法院将不予支持其抗辩主张。这可能导致被告承担不利的法律后果，如败诉或承担更多的法律责任。
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