针对您提出的“交通事故电动自行车二次鉴定后责任书是否要重新做”的问题，我给出以下详细解答：

结论：交通事故电动自行车二次鉴定后，责任认定书一般不需要重新做出，但会根据新的鉴定结果对原有责任认定进行补充或修正。

分析说明：

1. 责任认定书的性质：交通事故责任认定书是公安机关交通管理部门根据交通事故现场勘验、检查、调查情况和有关检验、鉴定结论，对交通事故的基本事实、成因和当事人的责任作出的具体认定。它具有一定的法律效力和权威性。

2. 二次鉴定的影响：如果电动自行车在事故中涉及的性能、速度、质量等关键因素需要二次鉴定，且二次鉴定结果与初次鉴定有较大出入，那么这可能会影响事故责任的划分。但并不意味着责任认定书需要完全重新做出。

3. 补充或修正程序：

   • 当二次鉴定结果出来后，如果确实对事故责任有影响，公安机关交通管理部门会根据新的鉴定结果，对原有的责任认定书进行补充或修正。
   • 补充或修正的内容会明确说明二次鉴定的结果以及其对事故责任的具体影响。
   • 修正后的责任认定书会重新送达给当事人，并作为处理交通事故的依据。

4. 特殊情况：

   • 如果二次鉴定结果揭示了新的、之前未知的事实，且这些事实对事故责任有决定性影响，那么公安机关交通管理部门可能会考虑重新做出责任认定书。
   • 但这种情况较为罕见，通常只是在初次鉴定存在重大错误或遗漏时才会发生。

法律建议：

• 如果您对二次鉴定结果或责任认定书的补充、修正有异议，可以依法向公安机关交通管理部门提出复核申请。
• 在复核过程中，您可以提供新的证据或理由来支持您的观点，并请求公安机关交通管理部门重新进行责任认定。
• 如果复核结果仍然不能满足您的诉求，您可以通过法律途径寻求进一步救济，如提起行政诉讼等。

希望以上解答能够对您有所帮助。如果您还有其他问题或需要进一步的法律帮助，请随时向我咨询。