结论：分居期间妻子整夜堵在卧室门口不让丈夫休息，这一行为可能涉及违法，具体需根据行为的性质、频率、造成的后果等因素综合判断。
分析：
从侵犯休息权的角度：
- 每个人都有休息的权利，这是基本的人权之一。如果妻子整夜堵在卧室门口，导致丈夫无法正常休息，这实际上是对丈夫休息权的侵犯。虽然这种侵犯可能不直接构成刑法上的犯罪，但可能违反了《民法典》中关于人格权保护的相关规定，丈夫有权要求妻子停止侵害，并可以寻求法律途径维护自己的权益。
从家庭暴力的角度：
- 家庭暴力不仅限于身体上的伤害，还包括精神上的折磨、控制等。如果妻子的行为导致丈夫精神受到严重损害，如长期失眠、焦虑、抑郁等，那么这种行为可能构成家庭暴力。根据《民法典》以及《反家庭暴力法》的相关规定，受害者有权向公安机关报案或者依法向人民法院起诉，要求施暴者承担法律责任。
从婚姻关系的角度：
- 分居期间，虽然夫妻双方可能不再共同生活，但婚姻关系仍然存在。妻子的行为如果严重影响了夫妻关系的和谐，甚至导致婚姻关系破裂，那么丈夫在离婚诉讼中可以提出相关证据，要求法院在财产分割、子女抚养等方面给予自己更有利的判决。
建议：
- 沟通协商：首先，建议夫妻双方进行坦诚的沟通，尝试解决分居期间的问题和矛盾。如果妻子的行为是出于某种误解或情绪失控，通过沟通可能能够化解误会，恢复和谐。
- 寻求第三方帮助：如果沟通无果，可以考虑寻求第三方（如亲友、调解员等）的帮助，进行调解或劝说。有时候，第三方的介入能够更客观地看待问题，提出更合理的解决方案。
- 法律途径：如果妻子的行为已经严重侵犯了丈夫的合法权益，且无法通过沟通或调解解决，那么丈夫可以考虑通过法律途径维护自己的权益。这包括向公安机关报案、向人民法院起诉等。
后续行动：
- 在采取任何行动之前，建议丈夫先收集相关证据，如录音、录像、证人证言等，以证明妻子的行为确实存在且对自己造成了损害。
- 如果决定通过法律途径解决，建议咨询专业律师（即我，姚绍梅律师，专注于婚姻家庭领域），以获取更具体的法律建议和帮助。
总之，分居期间妻子整夜堵在卧室门口不让丈夫休息的行为可能涉及违法，具体需根据实际情况判断。如果丈夫认为自己的权益受到了侵害，建议及时采取措施维护自己的权益。