医院工作人员化验单伪造一次是违法的，以下从多个角度进行分析：
一、法律定性
伪造化验单的行为，首先涉及到的是对医疗记录真实性的破坏。医疗记录，包括化验单，是医疗活动的重要凭证，其真实性对于患者的诊断、治疗以及后续的医疗纠纷处理都具有至关重要的意义。因此，伪造化验单不仅违反了医疗行业的职业道德，更可能触犯法律。
二、具体法律后果
行政处罚：
- 根据《医疗纠纷预防和处理条例》等相关法规，医疗机构及其医务人员若存在篡改、伪造、隐匿、销毁病历资料等行为，将受到卫生主管部门的警告，并可能面临一万元以上十万元以下的罚款。对于直接负责的主管人员和其他直接责任人员，也可能受到相应的处罚。
民事责任：
- 伪造化验单可能导致患者基于错误的信息接受不恰当的治疗，从而造成身体损害。在这种情况下，患者有权要求医疗机构承担民事赔偿责任，包括医疗费、误工费、精神损害抚慰金等。
刑事责任：
- 在极端情况下，如果伪造化验单的行为导致患者死亡或严重残疾，且医疗机构及其医务人员存在主观故意或重大过失，那么相关责任人员可能构成医疗事故罪，面临刑事处罚。虽然单次伪造化验单不一定直接构成此罪，但它是构成该罪的一种可能行为模式，且多次或情节严重的伪造行为将大大增加刑事责任的风险。
三、实际影响与建议
- 实际影响：伪造化验单不仅会对患者造成直接的损害，还会严重损害医疗机构的声誉和信誉。在医疗纠纷中，如果医疗机构被证实存在伪造化验单等不诚信行为，将极大地削弱其在法律上的抗辩能力，增加赔偿风险。
- 建议：对于医疗机构而言，应严格遵守医疗记录的真实性原则，加强内部管理，防止任何形式的伪造行为。对于医务人员而言，应坚守职业道德底线，不参与任何伪造医疗记录的行为。如果患者发现医疗机构或医务人员存在伪造化验单等违法行为，应及时向卫生主管部门举报，并寻求法律援助以维护自身权益。
综上所述，医院工作人员化验单伪造一次是违法的，且可能面临严重的法律后果。因此，医疗机构和医务人员应严格遵守相关法律法规和职业道德规范，确保医疗记录的真实性和完整性。如有任何法律疑问或需要进一步的法律帮助，请直接向我咨询。