企业并非必须明确安全生产第二责任人和第三责任人。具体分析如下：
在我国安全生产法律体系中，主要强调的是安全生产第一责任人的责任，即企业主要负责人（如法定代表人、实际控制人等）对安全生产负全面责任。而对于第二责任人和第三责任人，法律并未作出明确规定，这主要由企业根据自身情况和管理需要来设定。
法律法规层面：
- 《中华人民共和国安全生产法》等相关法律法规主要规定了企业主要负责人的安全生产责任，对于第二、第三责任人并未作出强制性要求。
企业管理层面：
- 虽然法律没有强制要求，但企业为了加强安全生产管理，可以自主设定第二、第三责任人等，以形成更加完善的安全生产责任体系。
- 企业可以通过内部规章制度、岗位职责等方式，明确各级管理人员和员工在安全生产中的具体责任，包括第二、第三责任人等。
实际操作建议：
- 企业应根据自身规模、行业特点、管理需求等因素，合理设定安全生产责任体系，包括是否需要明确第二、第三责任人等。
- 若企业决定设定第二、第三责任人，应确保责任明确、具体，并制定相应的考核和奖惩机制，以确保责任得到有效落实。
综上所述，企业并非必须明确安全生产第二责任人和第三责任人，但可以根据自身情况和管理需要来设定，以进一步完善安全生产责任体系。如有更多关于安全生产或公司法务的问题，欢迎随时向我咨询。