上线检车是否一定要盖章，主要取决于具体的检车流程和当地的规定。从一般情况来看，盖章是检车流程中的一个重要环节，但它并不是所有步骤中都必须进行的。

以大连二十高中检车线的车辆年检流程为例，盖章主要出现在以下几个环节：

1. 外检环节：拓号人员完成拓号后，会将拓号纸粘在一张单子下面，并盖好印章，再交给车主。
2. 缴费环节：车主在交费窗口完成缴费后，工作人员会在该单上盖一个圆形收款章，并给出一张收据。
3. 环保检测环节：在环保窗口，工作人员会在检测合格的单子上盖章，并打印出环保检测合格的小卡片。

然而，并不是所有的检车步骤都需要盖章。例如，在尾气检测、外观检验、上线检测等环节，主要是通过检测设备和人工检查来判断车辆的状况，这些环节可能并不需要盖章。

此外，不同地区的检车流程和要求也可能存在差异。有些地方可能更加注重盖章这一环节，以作为检车合格的凭证；而有些地方则可能采用其他方式，如电子记录或打印出的检测合格报告，来作为检车合格的依据。

因此，上线检车是否一定要盖章，需要根据当地的检车流程和规定来确定。如果车主对具体的检车流程和要求不清楚，建议咨询当地的车辆管理所或检车机构，以获取最准确的信息。