在高速公路上行驶时，机动车不得有以下行为：

1. 倒车、逆行、穿越中央分隔带掉头或者在车道内停车：这些行为会严重扰乱高速公路的交通秩序，极易引发交通事故，对行车安全构成极大威胁。根据相关法律法规，这些行为是被严格禁止的。

2. 在匝道、加速车道或者减速车道上超车：匝道、加速车道和减速车道是高速公路上的特定区域，有其特定的功能和使用规则。在这些区域超车不仅违反交通规则，而且极易与其他车辆发生碰撞，造成严重后果。

3. 骑、轧车行道分界线或者在路肩上行驶：车行道分界线是用来分隔不同车道的，路肩则是供紧急情况下使用的。骑、轧车行道分界线或在路肩上行驶会干扰其他车辆的正常行驶，增加交通事故的风险。

4. 非紧急情况时在应急车道行驶或者停车：应急车道是专为紧急情况设置的，如车辆故障、交通事故等需要紧急停车或救援的情况。非紧急情况下占用应急车道会妨碍救援车辆的通行，延误救援时机，因此也是被禁止的。

5. 试车或者学习驾驶机动车：高速公路车速快、路况复杂，不适合进行机动车试车或学习驾驶操作。新手驾驶员或未熟悉车辆性能的驾驶员在高速公路上行驶会极大增加交通事故的风险。

综上所述，机动车在高速公路上行驶时，必须严格遵守交通规则，确保道路交通安全。驾驶员应时刻保持警惕，合理控制车速，按规定车道行驶，避免上述禁止行为的发生。如有任何疑问或需要进一步的法律咨询，请直接向我提问。