无牌电动自行车再次上路，是否会被没收需分情况讨论，具体如下：

1. 地方性法规的差异性
   根据《道路交通安全法》第十八条，电动自行车属于非机动车的，应当经公安机关交通管理部门登记后方可上道路行驶。但具体处罚措施（如警告、罚款、没收）由各省、自治区、直辖市根据本地实际情况制定地方性法规或规章。例如：

   • 北京市：根据《北京市非机动车管理条例》，驾驶未经登记的电动自行车上路行驶，由公安机关交通管理部门扣车并处20元罚款，当事人接受处罚后车辆发还；若再次违法，可能面临更高罚款，但法律未明确规定“没收”措施。
     
   • 广东省：根据《广东省电动自行车管理条例》，未登记上牌的电动自行车上路，由公安机关交通管理部门责令改正并处50元罚款；拒不改正或再次违法的，可能扣留车辆至登记完成，但同样未规定“没收”。
     
   • 特殊情形：若电动自行车被鉴定为“机动车”（如超标电动车），则可能适用《道路交通安全法》对无牌机动车的处罚，包括扣留车辆、罚款甚至没收（但需符合《行政处罚法》中“没收违法所得或非法财物”的法定情形）。

2. 行政处罚的法定原则
   根据《行政处罚法》第九条，没收属于较严厉的行政处罚，需由法律、行政法规明确规定。目前，国家层面法律未授权交警部门对无牌电动自行车直接没收，地方性法规通常也仅规定“扣留车辆至补办登记”或罚款，而非没收。若地方性法规存在模糊表述（如“依法处理”），需结合具体执法解释或案例判断，但“没收”缺乏普遍法律依据。

3. 执法实践中的常见处理
   实践中，交警对无牌电动自行车的处罚通常遵循“教育为主、处罚为辅”原则：

   • 首次违法：以警告或罚款（如20-50元）为主，要求限期登记；
     
   • 再次违法：可能加重罚款金额，或扣留车辆至补办登记，但极少直接没收；
     
   • 拒不配合或存在其他违法行为（如闯红灯、逆行）：可能合并处罚，但仍需以地方性法规为依据。

建议：

1. 立即为电动自行车办理登记上牌，避免后续处罚；
   
2. 若已收到警告或罚款，需确认当地具体法规，必要时向交警部门咨询处罚依据；
   
3. 若车辆被扣留，可要求交警出具《行政强制措施凭证》，明确处理期限和流程。
   

如有进一步疑问，可直接向我咨询具体地区的处罚规定。