针对您提出的问题“新车已经上牌又在线上申请一次是否违法”，首先我们需要明确一点：在正常情况下，一辆新车只需要进行一次上牌流程，一旦车辆已经成功上牌，就无需再次进行上牌申请。
现在，让我们具体分析您的情况：
新车已经上牌：这意味着您的车辆已经完成了所有的上牌手续，包括车辆登记、号牌选取等，并且已经获得了合法的上路资格。
又在线上申请一次：如果您在车辆已经上牌之后，又尝试在线上进行一次上牌申请，这通常是不必要的，因为车辆已经具备了合法的上路资格。而且，从实际操作的角度来看，线上系统往往会识别到车辆已经上牌的信息，从而可能拒绝您的再次申请。
是否违法：从法律的角度来看，如果您在车辆已经上牌之后，又故意进行了一次上牌申请，并且试图通过欺骗或其他不正当手段获取新的号牌或登记信息，那么这种行为可能构成违法。然而，在大多数情况下，如果您只是误操作或不了解流程而进行了重复申请，并且没有造成任何实际后果，那么这种行为通常不会被视为违法。
综上所述，新车已经上牌之后又在线上申请一次通常不是违法行为，但也没有必要这样做。如果您确实需要进行某种变更或更新（如更换号牌、更新登记信息等），您应该按照正规的流程和要求进行申请，并遵守相关的法律法规和规定。
另外，值得注意的是，随着技术的发展和政策的优化，新车上牌流程已经变得越来越便捷和高效。例如，在某些地区，您可以通过线上平台完成全部的上牌流程，无需再到车管所进行线下办理。因此，如果您对上牌流程有任何疑问或需要进一步的帮助，建议您咨询当地的交管部门或相关机构以获取最准确和最新的信息。