结论：单项合同4000万以上是否必须要求一级资质，需结合具体行业、工程类型及现行法律法规综合判断，无法一概而论。以下分情况说明：

1. 建筑工程领域
   根据《建筑业企业资质标准》（建市〔2014〕159号）及《住房和城乡建设部关于简化建筑业企业资质标准部分指标的通知》（建市〔2016〕226号），建筑工程施工总承包资质分为特级、一级、二级、三级。其中：

   • 一级资质可承担单项合同额3000万元以上的建筑工程；
     
   • 二级资质可承担单项合同额3000万元以下的建筑工程。
     例外情形：若项目属于技术复杂或涉及特殊工艺（如超限高层、深基坑等），即使合同额未达3000万元，也可能要求一级资质；反之，若项目技术简单（如普通住宅），即使合同额超过3000万元，部分地区可能允许二级资质企业通过增项或联合体方式承接。
     法律依据：《建筑业企业资质管理规定》第四条、第五条。

2. 市政公用工程领域
   市政公用工程施工总承包资质同样分特级、一级、二级、三级，其中：

   • 一级资质可承担各类市政公用工程（如道路、桥梁、管道等）的施工，合同额无明确上限；
     
   • 二级资质可承担单项合同额4000万元以下的市政综合工程。
     关键点：若单项合同额超过4000万元，通常需一级资质；但若项目属于单一专业工程（如仅道路或仅桥梁），且规模未达一级资质标准，可能允许二级资质企业承接。
     法律依据：《市政公用工程施工总承包资质标准》第二条。

3. 其他工程领域（如电力、机电、公路等）
   不同行业对资质的要求差异较大。例如：

   • 电力工程：一级资质可承担各类发电工程、输电工程等，合同额无明确限制；二级资质可承担单机容量20万千瓦以下发电工程等。
     
   • 公路工程：一级资质可承担各级公路及其桥梁、隧道工程的施工，合同额无明确上限；二级资质可承担一级标准以下公路等。
     核心原则：需结合具体工程类型、技术复杂程度及地方性法规综合判断，部分行业可能以“工程规模”而非“合同额”作为资质划分依据。
     法律依据：各行业《施工总承包资质标准》及地方性实施细则。

4. 特殊情形：政府投资项目或招标文件强制要求
   即使法律法规未明确规定合同额与资质的对应关系，招标人仍可能在招标文件中设定高于法定标准的资质要求（如要求一级资质承接4000万元以上项目）。此类要求通常基于项目风险控制、技术保障等考虑，但需符合《招标投标法》第十八条“不得以不合理条件限制或排斥潜在投标人”的规定。
   建议：若认为招标文件资质要求不合理，可依法提出异议或投诉。

总结：单项合同4000万元以上是否必须一级资质，需根据工程类型、行业规定及项目特点综合判断。建议在实际操作中：

1. 查阅具体行业的《施工总承包资质标准》及地方性法规；
   
2. 关注招标文件或合同中的资质要求条款；
   
3. 若涉及复杂项目，可进一步向我咨询具体行业的资质合规问题。